REAGENTES SENDO ENVIADOS EM REGIME DE URGÊNCIA

Kit de detecção de Sars-nCov-19 por amplificação Isotérmica

Detecção de Sars-nCov-19 por amplificação isotermal a partir de 5 minutos por RPA (Recombinase Polymerase Amplification ).

Preparo da reação em 5 minutos e detecção em amostras com alto número de cópias a partir de 5 minutos. Pode ser utilizado em qualquer equipamento que faça incubação de microtubos de 0,2mL e faça leituras de fluorescência no canal FAM.

Acesse aqui o protocolo em português: Covid-19 Detection Kit Protocol-V1-PT-BR.pdf

Primers e sondas para COVID-19 utilizado em diversas regiões do mundo de acordo com a OMS

https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-2019/technical-guidance/laboratory-guidance

Preços 04/2020*:

Tipo	Preço	Escala de Síntese	Rendimento Mínimo Garantido
Primer Dessalinizado	Sob Consulta	200nmol	50nmol
Sonda Dessalinizada FAM/HEX-BHQ1	Sob Consulta	200nmol	50nmol
Primer HPLC	Sob Consulta	200nmol	25nmol
Sonda HPLC FAM/HEX-BHQ1	Sob Consulta	200nmol	25nmol

Preços de referência, para orçamento formal por favor entrar em contato.

Primers e sondas indicados pelo CDC (Atlanta, Georgia) para uso nos EUA:

Nome de Primer/Sonda	Sequência de DNA (5′ – 3′)	Conc. na reação
2019-nCoV_Nl-F	GACCCCAAAATCAGCGAAAT	500 nM
2019-nCoV_Nl-R	TCTGGTTACTGCCAGTTGAATCTG	500 nM
2019-nCoV_Nl-P	FAM-ACCCCGCATTACGTTTGGTGGACC-BHQ1	125 nM
2019-nCoV_N2-F	TTACAAACATTGGCCGCAAA	500 nM
2019-nCoV_N2-R	GCGCGACATTCCGAAGAA	500 nM
2019-nCoV_N2-P	FAM-ACAATTTGCCCCCAGCGCTTCAG-BHQ1	125 nM
2019-nCoV_N3-F	GGGAGCCTTGAATACACCAAAA	500 nM
2019-nCoV_N3-R	TGTAGCACGATTGCAGCATTG	500 nM
2019-nCoV_N3-P	FAM-AYCACATTGGCACCCGCAATCCTG-BHQ1	125 nM
Hs.RNAse P Forward	AGATTTGGACCTGCGAGCG	500 nM
Hs.RNAse P Reverse	GAGCGGCTGTCTCCACAAGT	500 nM
Hs.RNAse P Probe	FAM-TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG-BHQ1	125 nM

Atualmente, estão usando somente N1, N2 e RP.

O ensaio Hs.RNAseP tem como alvo o RNA de um gene humano e serve de controle interno para extração de RNA e transcrição reversa.

Primers e sondas usados na Alemanha:

Nome de Primer/Sonda	Sequência de DNA (5′ – 3′)	Conc. na reação
Assay 1 (RdRRP)
RdRP_SARSr-F2	GTGARATGGTCATGTGTGGCGG	600 nM
RdRP_SARSr-R1	CARATGTTAAASACACTATTAGCATA	800 nM
RdRP_SARSr-P2	FAM-CAGGTGGAACCTCATCAGGAGATGC-BHQ1	100 nM
A sonda acima é específica para 2019-nCoV, não detectará SARS-CoV
Assay 2 (gene E) (conjunto idêntico ao utilizado na França)
E_Sarbeco_F1	ACAGGTACGTTAATAGTTAATAGCGT	400 nM
E_Sarbeco_R2	ATATTGCAGCAGTACGCACACA	400 nM
E_Sarbeco_P1	FAM-ACACTAGCCATCCTTACTGCGCTTCG-BHQ1	200 nM
Assay 3 (N gene), veja https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6988269/
N_Sarbeco_F	CACATTGGCACCCGCAATC	600 nM
N_Sarbeco_R	GAGGAACGAGAAGAGGCTTG	800 nM
N_Sarbeco_P	FAM-ACTTCCTCAAGGAACAACATTGCCA-BHQ1	200 nM

Primers Paris COVID-19 Primers e sondas utilizados na França (Institut Pasteur, Paris):

Nome de Primer/Sonda	Sequência de DNA (5′ – 3′)	Conc. na reação
RdRp gene / nCoV_IP2
nCoV_IP2-12669Fw	ATGAGCTTAGTCCTGTTG	400 nM
nCoV_IP2-12759Rv	CTCCCTTTGTTGTGTTGT	400nM
nCoV_IP2-12696bProbe	HEX-AGATGTCTTGTGCTGCCGGTA-BHQ1	160 nM
RdRp gene / nCoV_IP4
nCoV_IP4-14059Fw	GGTAACTGGTATGATTTCG	400 nM
nCoV_IP4-14146Rv	CTGGTCAAGGTTAATATAGG	400 nM
nCoV_IP4-14084Probe(+)	FAM-TCATACAAACCACGCCAGG-BHQ1	160 nM
E gene/E_Sarbeco (conjunto idêntico ao utilizado na Alemanha)
E_Sarbeco_F1	ACAGGTACGTTAATAGTTAATAGCGT	400 nM
E_Sarbeco_R2	ATATTGCAGCAGTACGCACACA	400 nM
E_Sarbeco_P1	FAM-ACACTAGCCATCCTTACTGCGCTTCG-BHQ1	200 nM

Primers e sondas usados na China (新型冠状病毒核酸检测引物和探针序列):

Nome de Primer/Sonda	Sequência de DNA (5′ – 3′)	Conc. na reação
Target 1 (ORF1ab):
正向引物 ORF1ab（F）	CCCTGTGGGTTTTACACTTAA	500 nM
反向引物 ORF1ab（R）	ACGATTGTGCATCAGCTGA	500 nM
荧光探针 ORF1ab（P）	FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1	150 nM
Target 2 (N):
正向引物 N（F）	GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT	500 nM
反向引物 N（R）	CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG	500 nM
荧光探针 N（P）	FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-BHQ1	150 nM

Primers e sondas usados em Hong Kong:

Nome de Primer/Sonda	Sequência de DNA (5′ – 3′)	Conc. na reação
Assay 1 (Target: ORF1b-nsp14)
HKU-ORF1b-nsp14F	TGGGGYTTTACRGGTAACCT	500 nM
HKU- ORF1b-nsp14R	AACRCGCTTAACAAAGCACTC	500 nM
(HKU-ORF1b-nsp141P	FAM-TAGTTGTGATGCWATCATGACTAG-BHQ1	250 nM
Assay 2 (Target: N)
HKU-NF	TAATCAGACAAGGAACTGATTA	500 nM
HKU-NR	CGAAGGTGTGACTTCCATG	500 nM
HKU-NP	FAM-GCAAATTGTGCAATTTGCGG-BHQ1	250 nM

Primers e sondas usados no Japão:

Nome de Primer/Sonda	Sequência de DNA (5′ – 3′)	Conc. na reação
1) ORF1a set (PCR regular, não é real-time PCR)
NIID_WH-1_F501 (S)	TTCGGATGCTCGAACTGCACC	500 nM
NIID_WH-1_R913 (AS)	CTTTACCAGCACGTGCTAGAAGG	500 nM
NIID_WH-1_F509 (S)	CTCGAACTGCACCTCATGG	500 nM
NIID_WH-1_R854 (AS)	CAGAAGTTGTTATCGACATAGC	500 nM
NIID_WH-1_Seq_F519 (S)	ACCTCATGGTCATGTTATGG	500 nM
NIID_WH-1_Seq_R840 (AS)	GACATAGCGAGTGTATGCC	500 nM
2)S set (PCR regular,não é real-time PCR)
WuhanCoV-spk1-f (S)	TTGGCAAAATTCAAGACTCACTTT	500 nM
WuhanCoV-spk2-r (AS)	TGTGGTTCATAAAAATTCCTTTGTG	500 nM
NIID_WH-1_F24381 (S)	TCAAGACTCACTTTCTTCCAC	500 nM
NIID_WH-1_R24873 (AS)	ATTTGAAACAAAGACACCTTCAC	500 nM
NIID_WH-1_Seq_F24383 (S)	AAGACTCACTTTCTTCCACAG	500 nM
NIID_WH-1_Seq_R24865 (AS)	CAAAGACACCTTCACGAGG	500 nM
3)Primers and probes for real-time RT-PCR
NIID_2019-nCOV_N_F2	AAATTTTGGGGACCAGGAAC	500 nM
NIID_2019-nCOV_N_R2	TGGCAGCTGTGTAGGTCAAC	700 nM
NIID_2019-nCOV_N_P2	FAM-ATGTCGCGCATTGGCATGGA-BHQ1	200 nM

Primers e sondas usados na Tailândia

Nome de Primer/Sonda	Sequência de DNA (5′ – 3′)	Conc. na reação
WH-NIC N-F	CGTTTGGTGGACCCTCAGAT	1000 nM
O primer acima sobrepõe parcialmente ao utilizado pela sonda CDC 2019-nCoV_Nl-P
WH-NIC N-R	CCCCACTGCGTTCTCCATT	1000 nM
WH-NIC N-P	FAM-CAACTGGCAGTAACCA-BHQ1	250 nM

Fluoróforos e Quenchers Oferecidos:

Há laboratórios multiplexando os ensaios, com marcações com FAM e HEX, porém é preciso fazer ajustes no master
mix e concentração de primers.

Fluoróforos	Quenchers
Fluoróforos	BHQ1	BHQ2	BHQ3	MGB	TAMRA
Fluorescein	x				x
6-FAM	x			x	x
VIC-Repl.	x
HEX	x
TET	x
NED-Repl.		x
LIZ-Repl.		x
PET-Repl.		x
ROX-Repl.		x
Cy3		x
Cy3.5		x
Cy5		x
Cy5.5	x
TAMRA		x
Texas Red-Repl.		x
D3-repl.			x
D4-repl.			x
IRD700			x
Quasar 705			x
Redmond Red		x
YakimaYellow	x

Controle positivo para reações de PCR:

Construção em mini plasmídiocontendo as regiões alvo de todos os ensaios de PCR em tempo real listados
acima, as regiões não amplificáveis pelos ensaios listados foram modificadas para evitar expressão de qualquer proteína viral.

Entregue liofilizado em alíquotas equivalentes a 200 mil de cópias/µL quando ressuspenso em 1mL de ddH₂O. Uma recomendação geral de utilização é de aplicar 5µL do controle à 200 cópias/µL (1 mil cópias).

Útil para garantir o funcionamento dos primers e sondas.

Como se trata de um plasmídeo, a eficiência em relação ao RNA viral natural, ou segmento de RNA sintético pode ser diferente.

Vetores para Expressão de Proteínas do Novo Coronavírus SARS-CoV-2 COVID 19:

Possuímos plasmídeos sintéticos pET28a(+) com as sequências de proteínas do SARS-Cov-2, genoma de referênciaNC_045512.2 otimizadas para expressão em E.coli, com cauda poli-His para purificação e sítio de clivagem de protrombina.

Ainda podemos oferecer qualquer outro tipo de construção que precisarem, quer seja em vetores de clonagem ou expressão enviado pelo cliente ou que possuímos em estoque.

Proteína	Sequência de Referência	Mapa do vetor
M – membrane glycoprotein	YP_009724393.1
E – envelope protein	YP_009724392.1
S – surface glycoprotein	YP_009724390.1
RdRP – RNA-dependent RNA polymerase	YP_009725307.1
nsp16_OMT – 2′-O ribose methyltransferase	YP_009725311.1
endoRNAse	YP_009725310.1
3C-like proteinase	YP_009725301.1

Todos os reagentes listados nessa página têm seu uso dedicado para pesquisa científica.

A aplicação de qualquer um desses reagentes para fins de diagnóstico só é permitido somente após a validação como método próprio (in house), seguindo a legislação vigente (RDC 302/2005 e à nota técnica conjunta no. 001/2016 GEVIT/GGTPS/Anvisa e Grecs/GGTES/Anvisa) e manual da Sociedade Brasileira de Patologia Clínica acessado neste link:

http://www.sbpc.org.br/wp-content/uploads/2018/09/ListaDeOrientacaoEmDiagnosticoMolecular2018.pdf

Novidade! Proteínas Recombinantes para entrega a partir de 2 semanas.

COVID-19 recombinant protein, HEK293 expressed, high pure.
Molécula	Recombinante	Cat #	Descrição	Estrutura Molecular	Tam P	Tam G	Pureza Testada	Atividade Testada
COVID-19 Spike Glycoprotein (GenBank ID: QHD43416.1, 1273AA)	S	WB-SPN-S52H5	S protein (R667A), His Tag	S (14-R667A-1195)-His	100ug	1mg	95% SDS-PAGE	ACE2 binding via ELISA
	S	WB-SPN-C52H4	S protein (R683A,R685A), His Tag	S (16-R683A-R685A-1213)-His	100ug	1mg	85% SDS-PAGE	ACE2 binding via ELISA
	S1	WB-S1N-C52H4	S1 protein, His Tag (SEC-MALS Pure)	S1 (16-685)-His	100ug	1mg	90% SDS-PAGE/SEC-MALS	ACE2 binding via ELISA
		WB-S1N-C52H3	S1 protein, His Tag	S1 (16-685)-His	100ug	1mg	90% SDS-PAGE	ACE2 binding via ELISA
		WB-S1N-C5255	S1 protein, Fc Tag	S1 (16-685)-Fc	100ug	1mg	90% SDS-PAGE	ACE2 binding via ELISA
		WB-S1N-C82E8	S1 protein, His, Avitag Biotinylated (SEC-MALS Pure)	S1 (16-685)-His-Avi	25ug	200ug	90% SDS-PAGE/SEC-MALS	ACE2 binding via ELISA
		WB-S1N-C5257	S1 protein, Mouse IgG2a Fc Tag	S1 (16-685)-mFc	100ug	1mg	90% SDS-PAGE	—
	S-RBD (receptor binding domain)	WB-SPD-C52H3	S-RBD, His Tag	S-RBD (319-541)-His	100ug	1mg	90% SDS-PAGE	ACE2 binding via ELISA
		WB-SPD-C5255	S-RBD, Fc Tag (SEC-MALS pure)	S-RBD (319-541)-Fc	100ug	1mg	90% SDS-PAGE/SEC-MALS	ACE2 binding via ELISA
		WB-SPD-C82E9	S-RBD, His, Avitag Biotinylated (SEC-MALS pure)	S-RBD (319-541)-His-Avi	25ug	200ug	90% SDS-PAGE/SEC-MALS	ACE2 binding via ELISA
	S2	WB-S2N-C52H5	S2 protein, His Tag	S2 (686-1213)-His	100ug	1mg	90% SDS-PAGE	—
COVID-19 nucleocapsid phosphoprotein (NCBI Sequence YP_009724397.2)	NP	WB-NUN-C5227	Nucleocapsid protein, His (C-term)	Nuclecapsid protein (1-419)-His	100ug	1mg	95% SDA-PAGE	—
Angiotensin-converting enzyme 2 (UniProt ID : Q9BYF1-1)	ACE2-ECD Extracellular Domain	WB-AC2-H52H8	ACE2-ECD, His Tag	His-ACE2(18-740)	50ug	1mg	90% SDS-PAGE/SEC-MALS	—
		WB-AC2-H5257	ACE2-ECD, Fc Tag	ACE2(18-740)-Fc	50ug	1mg	90% SDS-PAGE/SEC-MALS	S.RBD binding via ELISA
		WB-AC2-H82E6	ACE2-ECD, His, Avitag Biotinylated (SEC-MALS Pure)	ACE2(18-740)-His-Avi	25ug	200ug	90% SDS-PAGE/SEC-MALS	S/S1 binding via ELISA
		WB-AC2-H82F9	ACE2-ECD, Fc, Avitag Biotinylated	ACE2(18-740)-Fc-Avi	25ug	200ug	90% SDS-PAGE	S.RBD binding via ELISA