Tiolação pode ser usada para introduzir a possibilidade de acoplamento específico a um ligante contendo sulfidrila através de uma ponte dissulfeto. O grupo tiol terminal permite a ligação de um oligo a vários ligantes, tais como biotina, fosfatase alcalina ou corantes fluorescentes, através de maleimida, iodeto, brometo ou derivados de sulfonil. Além disso, o grupo tiol terminal permite a ligação de um oligo a superfícies sólidas por meio de uma ligação iodoacetamida ou maleimida. A modificação de tiol pode ser colocada na extremidade 5 'ou 3' do oligonucleotídeo.
Tiol-Modificador C3 S-S
O grupo tiol é protegido por uma ligação dissulfato após a síntese do oligo e deve ser desprotegido por um agente redutor antes do uso. O agente redutor deve ser completamente removido imediatamente antes do oligo ser usado em uma reação de acoplamento. O DTT é mais comumente empregado como agente redutor.
Protocolo para desproteção do modificador de tiol.
1 - Clivar a ligação dissulfeto a 37 ° C em DTT (100 mM, pH 8,3) por aproximadamente 30 min;
2 - Dessalinize o oligo em uma coluna;
3 - Os oligos modificados com tiol que foram desprotegidos devem ser mantidos sob uma atmosfera inerte ou em uma solução contendo DTT (10 mM) para evitar a formação de dissulfeto oxidativo;
4 - O DTT deve ser removido completamente por extração com acetato de etila ou por dessalinização antes de usar o oligo;
5 - A Biolegio usa 3'-Thiol-Modifier C3 S-S CPG para a marcação 3', e Thiol-Modifier C6 para a marcação 5'-
