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Modificadores tiol

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Tiolação pode ser usada para introduzir a possibilidade de acoplamento específico a um ligante contendo sulfidrila através de uma ponte dissulfeto. O grupo tiol terminal permite a ligação de um oligo a vários ligantes, tais como biotina, fosfatase alcalina ou corantes fluorescentes, através de maleimida, iodeto, brometo ou derivados de sulfonil. Além disso, o grupo tiol terminal permite a ligação de um oligo a superfícies sólidas por meio de uma ligação iodoacetamida ou maleimida. A modificação de tiol pode ser colocada na extremidade 5 'ou 3' do oligonucleotídeo.

Tiol-Modificador C3 S-S

O grupo tiol é protegido por uma ligação dissulfato após a síntese do oligo e deve ser desprotegido por um agente redutor antes do uso. O agente redutor deve ser completamente removido imediatamente antes do oligo ser usado em uma reação de acoplamento. O DTT é mais comumente empregado como agente redutor.

Protocolo para desproteção do modificador de tiol.

1 - Clivar a ligação dissulfeto a 37 ° C em DTT (100 mM, pH 8,3) por aproximadamente 30 min;

2 - Dessalinize o oligo em uma coluna;

3 - Os oligos modificados com tiol que foram desprotegidos devem ser mantidos sob uma atmosfera inerte ou em uma solução contendo DTT (10 mM) para evitar a formação de dissulfeto oxidativo;

4 - O DTT deve ser removido completamente por extração com acetato de etila ou por dessalinização antes de usar o oligo;

5 - A Biolegio usa 3'-Thiol-Modifier C3 S-S CPG para a marcação 3', e Thiol-Modifier C6 para a marcação 5'-

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