Síntese de Oligonucleotídeos

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Padrões de qualidade de oligos customizados.

A síntese de DNA tem sido nosso principal produto por mais de 10 anos. Todos os oligos customizados são fabricados de acordo com os padrões de qualidade internacional. Esses padrões de qualidade refletem bons produtos confiáveis ​​e seguros como resultado de processos de produção e fabricação rigorosos.

Visão global

Um sistema de controle de qualidade rigoroso garante que você pode esperar oligonucleotídeos do mais alto padrão. Antes da síntese, todos os produtos químicos são verificados para atender aos nossos padrões de qualidade. Durante a síntese de oligo totalmente automatizada, todas as etapas da síntese são monitoradas por várias funções de controle em nossos sintetizadores de DNA. Desta forma podemos garantir a eficiência do acoplamento da síntese para atender às nossas demandas.

A síntese  de nossos oligos é garantida por rigoroso controle de qualidade. Todos os oligos são rotineiramente analisados ​​por medição de densidade óptica (OD). Além disso, os oligos são analisados ​​por eletroforese em gel e espectrometria de massa por cromatografia líquida (LCMS). Se os oligos não atenderem aos nossos requisitos, eles serão ressintetizados. O resultado de nosso rigoroso processo de controle de qualidade é um produto do mais alto padrão. Todos os oligos são fornecidos com nossa folha de especificações do produto, que inclui: % de conteúdo de GC, rendimento em nmol e μgram, OD, temperatura de fusão e peso molecular (MW).

A Genone usa química de fosforamidita otimizada e reagentes da mais alta qualidade. Os programas de manuseio de pedidos e de síntese de oligo resultam em uma eficiência média de acoplamento acima de 99,5%. Com essa eficiência, somos capazes de sintetizar oligos de DNA de até 130 bases. A síntese é realizada em condições de baixo teor de sal, o que evita a necessidade de purificação adicional para a maioria das aplicações básicas de biologia molecular, como PCR, sequenciamento, estudos de hibridização e estudos antisense. Purificação adicional por HPLC, PAGE ou cartucho (OPC) está disponível para aplicações mais sensíveis.

A síntese de oligonucleotídeos é realizada por uma adição em etapas de resíduos de nucleotídeos ao terminal 5 ‘da cadeia em crescimento até que a sequência desejada seja montada. Cada adição é chamada de ciclo sintético (figura 1) e consiste em quatro reações químicas: desbloqueio, acoplamento, cobertura e oxidação. No final da síntese, o oligo é liberado do suporte sólido e é eluído da coluna ou poço. Como suporte sólido, usamos esferas de poliestireno (PB).

A GenOne oferece cinco escalas de síntese diferentes para oligos de DNA: 25 nmol, 50 nmol, 100 nmol, 200nmol e 1000 nmol. Para cada escala de síntese existe uma restrição quanto ao comprimento do oligo.

Escala de 25 nmol: 40 bases máx. comprimento

Escala de 50 nmol: 150 bases máx. comprimento

Escala de 100 nmol: 225 bases máx. comprimento

Escala de 200 nmol: 300 bases máx. comprimento

Escala de 1000 nmol: 300 bases máx. Comprimento

Para escalas maiores entre em contato: vendas@genone.com.br

Oligo padrão de rendimento garantido

Para oligos de DNA padrão não rotulados e não purificados por HPLC / PAGE de até 30 bases, garantimos um rendimento mínimo. No entanto, em muitos casos, você receberá mais do que o mínimo garantido!

Escala de 25 nmol: 5 nmol min. produção

Escala de 50 nmol: 10 nmol min. produção

Escala de 100 nmol: 25 nmol min. produção

Escala de 200 nmol: 50 nmol min. Produção

Escala de 1000 nmol: 250 nmol min. produção

Método

A GenOne possui dois protocolos de síntese: ‘Alta Pureza’ e ‘B-puro’. O protocolo usado depende do comprimento do oligo. Isso significa que os protocolos foram otimizados para determinados comprimentos de oligo.

O protocolo de alta pureza são usados para oligos entre 1 e 79 bases.

Todos os oligos de DNA com mais de 80 bases são sintetizados em nosso protocolo de síntese B-puro.

Cada protocolo oferece a maior eficiência de acoplamento possível para a faixa especificada.

Formato e concentração

Seu oligo de DNA é enviado na forma liofilizada.

Os oligos de DNA podem ser entregues em tubos de 1.5ml na concentração ou combinação desejada.

Dê uma olhada em nosso site e obtenha mais informações sobre este assunto.

Os oligos não modificados podem ser usados ​​por pelo menos 12 meses quando armazenados a -20 ° C. Use água esterilizada sem nuclease para soluções de trabalho. Os oligonucleotídeos modificados com corantes fluorescentes devem ser mantidos longe da luz tanto quanto possível. Evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento, pois esse processo pode levar à degradação do oligo.

Todos os seus oligos de DNA são entregues com uma folha de especificações, incluindo conteúdo de GC, peso molecular, temperatura de fusão (Tm), valor de DO, sequência e quantidade em µgrama e nmol.

As modificações podem ser incorporadas durante (direta) ou após a síntese (indireta). Você pode escolher entre mais de 300 modificações. Se a modificação desejada não estiver listada em nosso site, entre em contato conosco (vendas@genone.com.br).

 

Visão geral de modificações disponíveis.

 

Todos os oligos de DNA são sintetizados em condições de baixo teor de sal. Isso evita a necessidade de purificação para a maioria das aplicações básicas de biologia molecular. Uma purificação adicional está disponível para aplicações mais sensíveis. Além disso, recomendamos a purificação de oligos com mais de 35 bases. Oferecemos três formas diferentes de purificação:

Purificação de cartucho de fase reversa – OPC

HPLC

PAGE

Mais sobre purificação

Purificação de oligo.

Você pode escolher entre três opções para purificar seu oligo: purificação por HPLC, purificação PAGE e purificação por cartucho de fase reversa.

Por que purificar?

Apesar da eficiência de acoplamento altamente eficiente alcançada pelo GenOne (um rendimento típico da etapa de síntese de 99,5%), cerca de 0,5% de toda a extensão falha. Isso leva a produtos de síntese truncados, sendo o mais longo deles (n-1) mer. A proporção relativa de material indesejado aumenta à medida que o comprimento do oligo aumenta. Para algumas aplicações, será desejável enriquecer o produto final em oligonucleotídeos de comprimento total.

Que tipo devo escolher?

O tipo de purificação escolhido depende muito de suas demandas em relação à pureza e ao rendimento do produto final. Você deve considerar que a purificação resulta em menor rendimento do produto final. A purificação por PAGE, embora resulte em uma pureza mais alta, geralmente dá rendimentos mais baixos do que a purificação por HPLC. O tipo de purificação escolhido depende também do comprimento de um oligo. Para oligos com comprimento superior a 50 bases, recomendamos a purificação PAGE para garantir a pureza do produto final.

Purificação de cartucho de fase reversa

Purificação com cartucho de fase reversa oferece o nível mais baixo de pureza (normalmente 80%). A base da separação é a diferença na hidrofobicidade entre o produto de comprimento total (que contém um 5′-DMT) e as sequências truncadas (sem grupos DMT). Como as diferenças na hidrofobicidade entre o produto DMT de comprimento total e as sequências truncadas não DMT são reduzidas à medida que o comprimento do oligo é aumentado, a purificação do cartucho não é recomendada para oligos> 50 bases.

Purificação de fase reversa de HPLC

HPLC de fase reversa opera no mesmo princípio que os cartuchos de fase reversa, mas normalmente produz um produto de 90% de pureza. A capacidade e as propriedades de resolução das colunas HPLC também são muito maiores do que os dispositivos de cartucho. Portanto, HPLC é o método de escolha para purificar grandes quantidades de oligos (ou seja,> = 1 μmol). Tal como acontece com os cartuchos, a HPLC de fase reversa geralmente não é recomendada para purificar oligos com mais de 50 bases.

PAGE Purification

Com a excelente resolução de PAGE, uma pureza de 95-99% pode ser alcançada. A base da separação é a carga e o peso molecular. Na maioria dos casos, um oligo de comprimento total (n) pode ser separado de oligos apenas uma base mais curta (n-1). PAGE é a técnica recomendada para purificar oligos com mais de 50 bases de comprimento. Os rendimentos de PAGE são inferiores aos de outros métodos devido à relativa extração ineficiente de oligos do gel.

Oligonucleotídeos de até 130 bases são obtidos com nosso protocolo de síntese de oligonucleotídeos B-puro. Este protocolo permite a síntese de oligo longo de alta qualidade a um preço acessível. Usando o protocolo B-puro, podemos alcançar uma eficiência de acoplamento> 99,5%.

Oligonucleotídeos com mais de 80 bases são sintetizados automaticamente neste protocolo. O controle de qualidade adicional é realizado em nosso sistema LC-MS de última geração para garantir a mais alta qualidade e funcionalidade otimizada dos oligonucleotídeos.

Informações sobre pedidos.

E-mail

Baixe nosso formulário de pedido em formato Excel e envie preenchido para: vendas@genone.com.br

Baixe aqui:

Agenda de entrega

Os oligos padrão são enviados em até 20 dias corridos, o pedido deve ser feito antes das 16h horário de Brasília.

Os oligos purificados e modificados, em condições padrão, são enviados em 20 corridos.

As sondas de DNA customizados são enviadas 25 dias corridos.

Os oligos de RNA são enviados em 25 dias corridos.

Envio e manipulação

Os detalhes de envio e manuseio dependem em grande parte do endereço do destinatário. Entre em contato conosco para obter mais informações.

Serviço pré-pago (carta de crédito) Oligo

Com o nosso serviço oligo pré-pago, tornamos os pedidos de oligo fáceis. A carta de crédito pode ser facilmente criada em uma conta em nosso sistema. Os Oligos podem então ser encomendados imediatamente, eliminando possíveis atrasos devido à autorização de compra. Entre em contato com a GenOne para obter mais informações.